伊維菌素的危害及檢測目的

阿維菌素類藥物（Avermectins，AVMs）由鏈霉菌的發酵產物中分離的大環內酯類抗生素，包括伊維菌素、多拉菌素、阿維菌素、愛普菌素等品種。阿維菌素類藥物是目前獸醫臨床上應用*泛的獸用驅蟲藥，被廣泛應用于牛、羊等動物，其作用機理是干擾害蟲神經生理活動，致使害蟲出現麻痹而中毒死亡。阿維菌素類藥物雖然作用劑量小，但其脂溶性較高，殘留時間長，世界衛生組織將其列為高毒化合物。該類藥物的不規范使用和食物鏈富集，易引發運動失調、呼吸緩慢、中樞神經系統中毒等癥狀，甚至致人死亡，對人類健康造成嚴重威脅，所以應對動物性食品中阿維菌素類藥物含量進行監測。我國農業農村部和國家市場監督管理總局2019年發布的GB 31650-2019《食品安全國家標準食品中獸藥最 大殘留*》中明確規定了伊維菌素、多拉菌素、阿維菌素、乙酰氨基阿維菌素在動物靶組織中的殘留*。

本文闡述了如何將伊維菌素從樣品基質中分離提取出來，并經過凈化后，轉化成液相色譜-串聯質譜儀可以檢測的形式。以提取、凈化為重點，依據國標GB/T 22953-2008，為檢測人員和相關領域研究人員提供一定的參考。

檢測項目：伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿維菌素

應用范圍：河豚魚肌肉、鰻魚肌肉、烤鰻

高效液相色譜法

方法原理：河豚魚、鰻魚和烤鰻中殘留的伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素殘留用乙腈提取后，正己烷脫脂，中性氧化鋁柱凈化。樣品溶液供液相色譜-串聯質譜儀檢測，外標峰面積法定量。

前處理儀器：

分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；組織搗碎機；勻漿機（8000 r/min）；離心機（4000 r/min）；超聲波水??；液體混勻器；固相萃取裝置；氮吹儀。 

檢測儀器： HPLC-MS/MS+ESI源

試樣的制備與保存

取樣品約500 g用組織搗碎機搗碎，裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標明標記，于零下18 ℃冰箱中保存。制樣操作過程中應防止樣品受到污染或殘留物含量發生變化。

前處理方法

1.提取

準確稱取2 g組織樣品（準確至0.01 g）至50 mL離心管中，加入8 mL乙腈，勻漿機上8000 r/min均質20 s，4000 r/min離心5 min，上清液轉移至50 mL離心管中；另取一50 mL離心管加入8 mL乙腈，洗滌勻漿刀頭10 s，洗滌液移入前一離心管中，用玻棒搗碎離心管中的沉淀，液體混勻器上振蕩30 s，4000 r/min離心5 min，上清液合并至50 mL離心管，離心管中的沉淀再加入6 mL乙腈，用玻棒搗碎離心管中的沉淀，液體混勻器上振蕩30 s，4000 r/min離心5 min，上清液合并至50 mL離心管中，乙腈定容至25.0 mL刻度，混勻備用。

2.凈化

向上述裝有樣品提取液的50 mL離心管中加入10 mL乙腈飽和的正己烷脫脂，渦旋振蕩1 min，4000 r/min離心5 min，棄去上層正己烷，重復此操作一次，下層乙腈溶液待用。

將中性氧化鋁凈化柱安置在固相萃取裝置上，準確移取10.0 mL已脫脂的樣品提取液至中性氧化鋁凈化柱中，控制流速在1 mL /min～2 mL /min，用2 mL×2乙腈淋洗凈化柱，收集全部流出液，流出液轉移至吹氮管中，50 ℃下氮氣吹至干，用1.00 mL乙腈溶解殘渣，并置超聲波水浴中超聲振蕩10 min，0.2 μm濾膜過濾，供液相色譜-串聯質譜測定。

國標解讀及注意事項

1.標準物質用乙腈配成100 μg/mL的標準儲備液，在零下18 ℃保存。

2.本方法通過乙腈提取，正己烷脫脂，中性氧化鋁柱凈化的方式進行目標化合物的提取凈化。

3.本方法采用洗滌均質刀頭，三次提取的方式，提高目標化合物的回收率。

4.氧化鋁柱凈化過程中除了活化溶液，其余溶液（上樣液和淋洗液）都要收集。為保證凈化效果，過柱時需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下。可用商品化的中性氧化鋁固相萃取柱替代方法中手工填充的中性氧化鋁凈化柱。

5.由于該類化合物沒有對應的同位素內標用于回收率的校正，所以本方法使用空白樣品提取液配制基質標準工作液，進行定量。

參考文獻

GB/T 22953-2008 河豚魚、鰻魚和烤鰻中伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法

河豚魚、鰻魚中伊維菌素殘留量測定的前處理流程圖：